2013/3/29 16:56:48
提问者:林学生 |
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激光共聚焦显微镜有关疑问
为什么在使用激光共聚焦显微镜观察荧光染色和拍照时，不能同时开显微镜的可见光？
| 潘銮凤老师 2013/3/29 17:03:53 |
因为荧光染料容易褪色，褪色后就失去了发射荧光的能力，就无法检测到理想的实验结果，而光照则会加快荧光的褪色，所以在使用荧光染料时一般都加上荧光保护剂和保存样品在暗盒或包在避光纸内，同时在显微镜观察时尽可能少开光源，在开激光拍照时，不开可见光。
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2013/3/29 16:52:10
提问者:刘同学 |
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杂交探针相关问题
用封闭液封闭后，杂交探针怎么还可以与待测的核酸杂交呢？
| 潘銮凤老师 2013/3/29 16:55:59 |
封闭液的封闭是非特异的，与待测核酸的结合力比较低，而且是可逆的（所有的封闭都是可逆的）。待加入的探针碰到与之互补的特异核酸片段时，探针与待测特定核酸的结合力远远超出了原来封闭剂的结合力，因此就取代了封闭剂，形成了特异结合的双链核酸。而其它地方，包括没有核酸的空间及与探针没有互补的核酸条带与封闭剂的结合力和探针的结合力差异小，就可与探针竞争结合位点，减少了探针的非特异结合，从而起到了封闭作用。
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2013/3/29 16:50:07
提问者:李同学 |
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检测肿瘤组织中的指标
潘老师，你好，因为不懂，想请教一个浅显的问题，定量PCR就是RT-PCR吗？我想检测肿瘤组织中的一个指标，是不是一定要取新鲜标本才可以做定量PCR？如果是取培养的细胞或石蜡标本是否可以做？做Western检测指标的话，新鲜样本，石蜡包块还是肿瘤培养细胞都可以做吗？
| 潘銮凤老师 2013/3/29 16:53:03 |
定量PCR包括对mRNA和DNA进行的半定量和实时定量，一般是指对mRNA进行实时荧光定量，这在PCR的课程中都讲到的。对于mRNA表达水平进行定量，需要新鲜的样品，因为mRNA很容易降解。对于Western分析蛋白质也需要新鲜组织或细胞，因为蛋白质也是容易被破坏。当然在没有新鲜组织的情况下，可以采用新鲜时就进行液氮冷冻保存的样品。至于石蜡样品可用原位杂交和组织化学的方法检测mRNA和蛋白质的表达。
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